6 просмотров
Рейтинг статьи
1 звезда2 звезды3 звезды4 звезды5 звезд
Загрузка...

Методы определения общего холестерина в крови

Общий холестерин и его фракции

Холестерин — одноатомный спирт, в молекуле которого имеется ядро циклопентанпергидрофенатрена. Он является компонентом клеточных мембран, предшественником при синтезе желчных кислот, стероидных гормонов (глюкокортикоидов, альдостерона, половых гормонов), витамина D, обнаруживается во всех тканях и жидкостях организма как в свободном состоянии, так и в виде эфиров с жирными кислотами, преимущественно с линолевой (около 10% всего холестерина). Синтез холестерина происходит во всех клетках организма. Основными транспортными формами в крови являются α‑, β‑ и преβ‑липопротеины (или, соответственно, липопротеины высокой, низкой и очень низкой плотности). В плазме крови холестерин находится главным образом в форме сложных эфиров (60‑70%). Эфиры образуются либо в клетках в реакции катализируемой ацил-КоA-холестерин-ацилтрансферазой, использующей в качестве субстрата ацил‑КоA, либо в плазме в результате работы фермента лецитин-холестерин-ацилтрансферазы, осуществляющей перенос жирной кислоты со второго атома углерода фосфатидилхолина на гидроксильную группу холестерина. В плазме крови главными источниками холестерина и фосфатидилхолина для реакции служат липопротеины высокой и низкой плотности, этим путем образуется большая часть эфиров холестерина плазмы.

Для определения содержания холестерина в крови используют следующие методы:

  1. Титрометрические.
  2. Гравиметрические.
  3. Нефелометрические.
  4. Тонкослойная и газожидкостная хроматография.
  5. Полярографические методы, позволяют определять общий и свободный холестерин в присутствии ферментов холестеролоксидаз и холестеролэстераз.
  6. Флюориметрия по реакции с о‑фталевым альдегидом и другими реактивами.
  7. Ферментативные методы — определение протекает в одной пробирке, но в несколько этапов: ферментативный гидролиз эфиров холестерина, окисление холестерина кислородом воздуха с образованием холест‑4‑ен‑3‑ола и перекиси водорода. В качестве ферментов применяются холестеролоксидаза, холестеролэстераза, пероксидаза, каталаза. Ход реакции можно регистрировать:
  • спектрофотометрически по накоплению холестенола.
  • по убыли кислорода в среде.
  • по изменению окраски раствора, в качестве хромогенов — индикаторов протекания реакций — используются 4‑гидроксибензоат, 4‑аминофеназон, 4‑аминоантипирин.

Все эти методы весьма специфичны и хорошо воспроизводимы.

  1. Колориметрические методы, в основе которых лежат следующие цветные реакции:
  • реакция Биоля‑Крофта с использованием персульфата калия, уксусной и серной кислоты и с появлением красного окрашивания.
  • реакция Ригли, базирующаяся на взаимодействии холестерина с реактивом, в составе которого имеются метанол и серная кислота.
  • реакция Чугаева, в которой появляется красное окрашивание после реакции холестерина с ацетилхлоридом и хлористым цинком.
  • реакция Либермана‑Бурхарда, при которой холестерин окисляется в сильно кислой абсолютно безводной среде с образованием сопряженных двойных связей. В результате образуется соединение холестагексаена с концентрированной серной кислотой изумрудно‑зеленого цвета с максимумом абсорбции при 410 и 610 нм. Особенностью этой реакции является отсутствие стабильности окрашивания. В литературе можно встретить разное соотношение ингредиентов в реактиве Либерман-Бурхарда: чем выше содержание уксусного ангидрида, тем с большей скоростью протекает реакция. Протеканию реакции способствуют сульфосалициловая, паратолуенсульфоновая, диметилбензол‑сульфоновая кислоты. С эфирами холестерина реакция идет медленнее, чем со свободным холестерином, скорость возрастает при повышении температуры, свет оказывает разрушающее воздействие на продукты реакции. Все методы, основанные на реакции Либерман-Бурхарда, подразделяются на прямые и непрямые:
◊ к непрямым относятся методы Энгельгарда‑Смирновой, Раппопорта‑Энгельберга, Абеля и заключаются в предварительной экстракции холестерина из сыворотки с последующим определением его концентрации. Из этой группы методов наиболее известен метод Абеля с экстракцией свободного и этерифицированного холестерина изопропанолом или петролейным эфиром, гидролизом эфиров холестерина и последующей реакцией Либерман-Бурхарда. Методы этой группы более воспроизводимы и специфичны;
◊ в прямых методах (Илька, Мрскоса‑Товарека, Златкис‑Зака) холестерин предварительно не экстрагируется, а цветная реакция осуществляется непосредственно с сывороткой. Выявлено, что определение концентрации холестерина по Ильку при сравнении с методом Абеля дает более высокие (по разным авторам на 6%, на 10‑15%) значения, что необходимо учитывать при типировании гиперлипопротеинемий.
  • реакция Калиани‑Златкиса‑Зака, заключающаяся в появлении красно‑фиолетового окрашивания раствора при окислении холестерина хлорным железом в уксусной и концентрированной серной кислотах. Эта реакция в 4‑5 раз чувствительнее, чем реакция Либерман‑Бурхарда, но менее специфична.

Унифицированными методами являются колориметрические методы Илька и Калиани-Златкис-Зака.

Определение содержания общего холестерина
в сыворотке крови методом Илька

Принцип

Основан на реакции Либерман‑Бурхарда: в сильно кислой среде в присутствии уксусного ангидрида происходит дегидратация холестерина с образованием окрашенного в зеленовато‑синий цвет бисхолестадиенилмоносульфоновой кислоты.

Нормальные величины

Сыворотка (указанный метод)0 ‑ 1 год1.81‑4.53 ммоль/л
до 20 лет3.10‑5.80 ммоль/л
20 ‑ 293.40‑5.80 ммоль/л
30 ‑ 393.70‑6.20 ммоль/л
40 ‑ 493.70‑6.80 ммоль/л
50 ‑ 594.10‑7.30 ммоль/л
60 ‑ 694.20‑7.40 ммоль/л

Определение количества общего холестерина
в сыворотке крови методом Златкис‑Зака

Принцип

Свободный и эфирносвязанный холестерин окисляется хлорным железом в присутствии уксусной, серной и фосфорной кислот с образованием ненасыщенных продуктов, окрашенных в фиолето‑красный цвет.

Нормальные величины

Сыворотка (указанный метод)3,1‑6,5 ммоль/л

Определение содержания общего холестерина
ферментативным методом по набору «Новохол»

Принцип

Основан на использовании сопряженных ферментативных реакций, катализируемых: 1) холестеролэстеразой, катализируещей гидролиз эфиров холестерина до свободного холестерина; 2) холестеролоксидазой, катализирующей превращение холестерина в холестенон с образованием перекиси водорода; 3) пероксидазой, катализирующей в присутствии фенола окисление перекисью водорода 4‑аминоантипирина с образованием окрашенного продукта розово‑малинового цвета.

Нормальные величины

Сыворотка
(указанный метод)
20‑29 лет3,70‑6,51 ммоль/л
30‑39 лет4,25‑7,04 ммоль/л
40‑49 лет4,37‑7,70 ммоль/л
старше 50 лет4,55‑8,24 ммоль/л
Спинномозговая жидкость0‑0,013 ммоль/л
Слюна0,065‑0,233 ммоль/л
Желчьпеченочная2,1‑5,4 ммоль/л
пузырнаяв среднем 11,1 ммоль/л

Влияющие факторы

Завышение результатов при колориметрических методах исследования происходит при высоком содержании в пробе билирубина, гемоглобина, витамина A; при ферментативном методе — оксикортикостероидов и применении антикоагулянтов (фторидов, оксалатов).

Клинико‑диагностическое значение

Сыворотка

Существенное повышение содержания холестерина отмечается при гиперлипопротеинемии IIa типа (семейная гиперхолестеринемия), IIb и III типа (полигенная гиперхолестеринемия, семейная комбинированная гиперлипидемия), умеренное повышение наблюдается при гиперлипопротеинемии I, IV, V типа, а также заболеваниях печени (внутри‑ и внепеченочный холестаз), заболеваниях почек, злокачественных опухолях поджелудочной железы, гипотиреозе, заболеваниях сердечно‑сосудистой системы, беременности, сахарном диабете.

Читать еще:  Анализ на сахарный диабет гемоглобин

Снижение выявляется при гипертиреозе, циррозе печени, злокачественных опухолях печени, гипопротеинемии и аb‑липопротеинемии.

Спинномозговая жидкость

Накопление холестерина выявляется при менингите, опухоли или абсцессе мозга, кровоизлияниях в мозг, при рассеяном склерозе.

Снижение значений обнаруживается при церебральной и кортикальной атрофии.

Определение концентрации свободного и
этерифицированного холестерина в сыворотке крови

Свободный холестерин способен образовывать с дигитонином, томатином, пиридинсульфатом труднорастворимые соединения. Чаще всего применяют водно‑спиртовый или изопропаноловый раствор дигитонина.

Принцип

Холестерин экстрагируют из сыворотки с помощью изопропилового спирта, экстракт делят на две части, в одной определяют содержание общего холестерина. В другой порции экстракта свободный холестерин осаждают дигитонином, супернатант отбрасывают, а осадок растворяют и определяют содержание свободного холестерина любым методом. Содержание этерифицированного холестерина рассчитывают как разницу между общим и свободным.

Нормальные величины

Сывороткафракция этерифицированного холестерина составляет 60‑80% от общего

Клинико‑диагностическое значение

Коэффициент этерификации холестерина является важной функциональной пробой печени. Снижение коэффициента пропорционально снижению функции печени: острый и обострения хронического гепатита, механическая желтуха, цирроз печени. Степень этерификации также зависит от активности сывороточного фермента лецитин-холестерин-ацил-трансферазы, поэтому хранение пробы при комнатной температуре может изменить соотношение между свободной и этерифицированной фракцией холестерина.

Определение содержания α‑холестерина

Принцип

Разделение α‑ и β‑липопротеинов основано на избирательной способности липопротеинов очень низкой и низкой плотности образовывать нерастворимые комплексы с гепарином в присутствии двухвалентных катионов Mn 2+ . Липопротеины высокой плотности при этом остаются в надосадке, где определяют содержание α‑холестерина любым способом.

Определение α‑холестерина используется для расчета индекса атерогенности:

Нормальные величины

α‑Холестерин
Сыворотка0,9‑1,9 ммоль/л
Индекс атерогенности
СывороткановорожденныеВозрастание концентрации α‑холестерина клинически не значимо, наблюдается при доброкачественных состояниях. Снижение содержания α‑холестерина свидетельствует об угрозе атеросклероза.

Возрастание индекса атерогенности до 4 и более наблюдается при ишемической болезни сердца и атеросклерозе.

Методы определения общего холестерина в крови

Содержание общего холестерина в сыворотке крови здорового человека колеблется в пределах 150-250 мг/дл (среднее значение 200 мг/дл). На эфиры холестерина с жирными кислотами приходится 60-70% от общего холестерина и 30-40%- на свободный холестерин. В сыворотке крови отношение свободного холестерина к эфирообразующему- величина постоянная.

Увеличение содержания холестерина в плазме крови (гиперхолестеринемия) наблюдается при микседеме, менингитах, диабете, атеросклерозе, при некоторых заболеваниях печени. Описана также наследственная гиперхолестеринемия. Снижение содержания холестерина в плазме (гипохолестеринемия) отмечается при хронической сердечной недостаточности, острых инфекционных заболеваниях, острых панкреатитах, гипертиреозе.

Принцип метода. Метод основан на том, что холестерин в присутствии уксусного ангидрида и смеси уксусной и серной кислот образует окрашенные продукты, интенсивность окраски которых определяется колориметрически.

Ход определения. В сухую пробирку (присутствие следов воды мешает развитию окраски) вносят 2 мл рабочего реактива (реактив отмеривают стеклянным цилиндром) и 0,1 мл негемолизированной сыворотки. Сыворотку добавляют медленно, так чтобы она стекала по стенке пробирки. Пробирку энергично встряхивают 10-12 раз и помещают в термостат при 37?С на 20 мин. Для приготовления контрольной пробы (одна-две пробы на группу) в сухую пробирку отмеривают 2 мл рабочего реактива. Окраску растворов измеряют на ФЭКе против контроля с красным светофильтром. Содержание холестерина в пробирках определяют по калибровочной кривой.

Калибровочный график для определения концентрации холестерина.

Оформление работы. Записывают принцип метода, результаты колориметрии, расчеты.

Методы определения общего холестерина в крови

Холестерин это один из жиров, соединение вырабатывается печенью и имеет очень важное значение для правильного функционирования всех органов и организма в целом.

Каждая клетка нашего тела содержит в наружной мембране часть холестерина.

У животных это соединение представлено как воскообразный стероид, который транспортируется кровью. Холестерин относится к спиртам. По химической номенклатуре называется холестерол. Использовать можно оба эти названия.

Это вещество выполняет ряд функций:

  • покрывает нервные волокна;
  • участвует в процессе метаболизма жирорастворимых витаминов;
  • принимает участие в выработке витамина Д в кожном покрове под воздействием солнечного света;
  • активный компонент в процессе синтеза половых гормонов;
  • участвует в производстве кортизола, альдостерона.

Для человеческого организма, нормальный уровень выработки холестерина имеет показатель от 3,5 ммоль на литр до 7,7 ммоль на литр. Хотя, если прислушиваться к рекомендациям специалистов из Великобритании, то показатель выше 6 моль на литр считается уже завышенным. При таком показателе увеличивается риск возникновения атеросклеротической патологии. Практически все врачи классифицируют показатели — миллиграмм/децилитр или миллимоль/литр, поэтому общепринятые значения могут отличаться:

  1. в норме содержание меньше 200 мг/дл;
  2. выше нормы — до 239 мг/дл;
  3. высокий показатель — 240 мг/дл;
  4. подходящий уровень — от 5 до 6,3 ммоль/л;
  5. незначительно завышен — от 6,4 ммоль/л;
  6. допустимый, но высокий — от 6,5 до 7,7 ммоль/л;
  7. завышенный уровень — выше 7,9 ммоль/л.

Рекомендованный уровень холестерина в сыворотке крови человека, должен составлять плотность 5 ммоль на литр.

Методы определения содержания холестерина

Современная медицина на сегодняшний день разработала много методов определения холестерина в крови.

Для одной из диагностических проверок, достаточно всего лишь обратиться ближайшую больницу.

Если присутствует в организме высокий уровень, это может привести к плохим последствиям.

В таком случае заниматься самолечением категорически запрещено.

Методики и принцип определения:

  • Гравиметрический;
  • Титриметрический;
  • Флуориметреческий метод способен измерять холестерин при малейшем объеме сыворотки крови;
  • Газохроматографический и хроматографический;
  • Колориметрический метод;
  • Тонкослойная хроматография;
  • Газожидкостная хроматография;
  • Полярографический метод способен точно определить общий холестерин в сыворотке крови, а также свободный;
  • Ферментативный метод. Протекает по определенному алгоритму.
  • Спектрофотометрический — зависит от содержания холестерола.

Существует также поляриметрический метод. Этот метод основан на проведении нескольких цветных реакций.

Первая реакция это Биоля-Крофта. Для неё используются уксусную кислоту и серную, при наличии холестерина раствор приобретает красный цвет.

Вторая реакция — это Ригли. Реакция заключается во взаимодействии холестерина с раствором, содержащим метанол и серную кислоту.

Третья реакция – Чугаева, основана на взаимодействии холестерина с ацетилхлоридом и хлористым цинком.

При наличии холестерина раствор приобретает красную окраску. Следующая реакция Либермана-Бурхарда. В ходе реакции происходит окисление холестерина в кислой среде, не содержащей воды.

В результате образуются сопряженные двойные связи. В результате появляется комплексное соединение изумрудно-зеленого цвета. Эта реакция отличается от остальных тем, что не имеет постоянного окрашивания. В медлитературе встречается разное соотношение компонентов реакции.

Последний Метод это реакция Калиани-Златкмса-Зака.

Результат реакции должен проявиться в виде красно-фиолетового окраса раствора. Весь процесс происходит в результате окисления холестерина под влиянием серной и уксусной кислот.

Заболевания при высоком уровне холестерина в крови

Высокий уровень холестерина может привести к различным заболеваниям.

Врачи рекомендуют сдавать общий анализ крови на концентрацию холестерина каждый год.

Такой подход позволяет выявить большое количество патологий на ранних стадиях развития.

При наличии отклонений от нормы в содержании ЛПВП и ЛПНП в организме возможно возникновение ряда заболеваний, таких как:

  1. стенокардия;
  2. инсульт;
  3. инфаркт миокарда;
  4. расстройства в работе сосудистой системы;
  5. атеросклероз и другие патологии.

Стенокардия — это болезнь, которая характеризуется острой болью, дискомфортными ощущениями в грудной клетке. Данные симптомы спровоцированы тем сердечная мышца не получает необходимое количество кислорода и питательных веществ для нормальной работы.

Микроинсульт, инсульт. Возникает вследствие образования в крови сгустка, способного блокировать кровеносный сосуд, расположенный в головном мозге.

В результате происходит нарушение кровообращения, приводящее к постепенному отмиранию клеток определенного участка головного мозга.

Инфаркт миокарда это патология, формирующаяся при блокировке доступа крови к клеткам сердечной мышцы, в результате чего возникает кислородное голодание. Чаще всего это спровоцировано образованием тромба, расположенного в просвете коронарных артерий. Это может привести к частичной гибели сердечной мышцы.

Атеросклероз. Данная патология бывает нескольких типов.

Выделяют атеросклероз нижних конечностей, сосудов сердца, печени, почек, желудка и других органов. Возникает в результате образования атеросклеротических бляшек, которые расположены в сосудах кровеносной системы. Они затрудняют или полностью перекрывают кровоток, что приводит к нарушению кровообращения. Прогрессирование заболевания может спровоцировать наступление летального исхода.

Поэтому при выявлении нарушений на ранних стадиях нужно обратиться к специалистам, чтобы не допустить образование бляшек.

Причины и симптомы повышенного холестерина

Существует множеств разных симптомов, по которым можно самостоятельно выявить наличие повышенного холестерина в крови.

Опытный специалист определяет это без исследования. Легче всего определить наличие повышенного уровня по присутствию в организме характерных нарушений в работе.

Для повышенного холестерина характерно наличие у больного следующих симптомов:

  • Появление желтых пятен на кожных покровах, особенно вокруг глаз. Данный симптом имеет медицинское название — ксантома. Чаще всего это может передаваться наследственным путем.
  • Появление болевых ощущений возникающих в конечностях при оказании на организм физической нагрузки. Симптом развивается в результате сужения артериальных сосудов снабжающих кровью конечности.
  • Наличие стенокардии, возникающей в результате сужения коронарных артерии сердца.
  • Образование мини инсульта, в результате формирования сгустков крови и разрыва сосуда.
  • Развитие сердечной недостаточности, в результате недостатка в кислороде и питательных веществ.

Все причины, по которым может быть повышен холестерин в крови, разделяют на два вида изменяемые и неизменяемые.

Основным фактором, оказывающим влияние на повышение уровня холестерина в крови, является неправильное питание и неправильный образ жизни. Помимо этого на этот показатель может оказывать влияние состояние окружающей среды.

К неизменяемым факторам относятся возраст и генетическая предрасположенность в возникновении повышенной концентрации холестерина.

Основными причинами повышения холестерина являются:

  1. Вредные привычки. Курение является одной из основных причин возникновения патологии. Потребление алкогольных напитков может привести к алкогольной зависимости, как правило, все алкоголики имеют высокий уровень ЛПНП, а уровень ЛПВП — понижен.
  2. Лишний вес. Группа людей, которые страдают от лишних килограммов или ожирения обладают высоким уровнем ЛПНП. Это наблюдается чаще, чем у людей с нормальным весом.
  3. Неподвижный образ жизни. Для сохранения нормального уровня холестерина, нужно ежедневно делать утреннюю зарядку на протяжении 20 минут. По возможности рекомендуется ходить в спортзал на занятия с тренером, заниматься аквааэробикой, ездить на велосипеде минимум раз в неделю. У кого нет такой возможности, могут заниматься быстрой ходьбой ежедневно на протяжении 1 часа. Не рекомендуется вести малоподвижный образ жизни.

Помимо этого к основным причинам относится неправильное питание. Некоторые продукты содержат повышенное количество холестерина. Например, яйца, почки. Чтобы избежать повышенного показателя, следует придерживаться правильного питания. Рекомендуется рассчитывать количество калорий на каждый день с учетом энергетической и пищевой ценности продуктов.

Факты о холестерине рассмотрены в видео в этой статье.

2. Нарушения метаболизма. Биохимия специализированных тканей

Методы определения содержания холестерина сыворотки крови

Методы определения содержания холестерина сыворотки крови

фото Методы определения содержания холестерина сыворотки кровиМетоды определения общего холестерина подразделяются на:

1) колориметрические. Насчитывается около 150 колориметрических методов, основывающихся на реакциях образования цветных комплексов;

2) нефелометрические методы, основанные на сравнении степени мутности стандартного и исследуемого раствора;

3) титрометрические методы;

4) флюориметрические методы, позволяющие определять холестерин в микрообъемах сыворотки крови (например, в 0,01 мл ее);

5) газохроматографические и хроматографические методы;

6) гравиметрические методы.

Метод определения общего холестерина в сыворотке крови, основанный на реакции Либермана—Бурхарда (метод Илька)

В сильнокислой безводной среде ХС взаимодействует со смесью серной, уксусной кислот и уксусного ангидрида. В ходе реакции ХС последовательно окисляется. При этом каждая стадия реакции сопровождается образованием молекулы ХС, которая имеет на одну двойную связь больше, чем соединение, из которого она образовалась.

В результате конечного окисления иона 3,5-холестодиена получается окрашенное соединение, растворенное в серной кислоте и дающее максимум абсорбции при 410 и 610 нм. Из-за неустойчивости окраски соединения время фотометрирования должно быть точно выдержано.

Реакционная смесь со стандартным раствором ХС имеет изумрудный цвет. Однако пробы сыворотки могут давать зеленый, голубой, бурый цвета. Это связано с тем, что в результате образования эндогенного тепла в реакцию вступают многие компоненты сыворотки крови. Кроме того, в реакции Либермана—Бурхарда свободный ХС и его эфиры образуют цветные комплексы с разным коэффициентом молекулярного поглощения. В случае высокого содержания эфиров ХС оптическая плотность оказывается более высокой. Поскольку на прямое определение ХС влияют многие факторы, реакцию ХС со смесью Либермана—Бурхарда нельзя считать специфичной.

Прямой метод определения ХС относительно прост в исполнении и недорог. Однако токсичность и способность вызывать коррозию системы в современных анализаторах ограничивают применение метода. В крупных лабораториях предпочтение отдают ферментативным методам определения ХС.

Референтные величины: холестерин 4,65—6,46 ммоль/л (180—250 мг/дл).

При концентрации холестерина в пробе выше 16 ммоль/л сыворотку разводят физиологическим раствором в соотношении 1 : 1 (результат).

Реакция чувствительна на изменение температуры, поэтому необходимо особенно соблюдать охлаждение реакционной смеси после добавки серной кислоты.

Билирубин в концентрации выше 50 мкмоль/л влияет на результат анализа.

Интерференцию билирубина можно исправить расчетом. Содержание 17 мкмоль/л билирубина приводит к завышению содержания холестерина в сыворотке примерно на 0,1 моль/л.

Сыворотка должна быть негемолизированной.

1. Ледяная уксусная кислота.

2. Концентрированная серная кислота.

3. Уксусный ангидрид.

4. Абсолютный этиловый спирт.

5. Кислотная смесь: в сухую колбу наливают 10 мл ледяной уксусной кислоты и 50 мл уксусного ангидрида, затем при постоянном перемешивании и охлаждении добавляют 10 мл концентрированной серной кислоты. Смесь должна быть бесцветной или слегка желтоватой. Хранить в холодильнике в темной склянке с притертой пробкой.

6. Калибровочный раствор: 232 мг холестерина растворяют в 2—3 мл хлороформа и доводят до объема 100 мл абсолютным этиловым спиртом. Приготовленный раствор содержит холестерин в концентрации 6 ммоль/л.

К 2,1 мл кислотной смеси медленно по стенке пробирки добавляют 0,1 мл плазмы или сыворотки без признаков гемолиза, перемешивают встряхиванием и ставят на 20 мин в термостат или водяную баню при температуре 37 °С, затем фотометрируют в кювете с длиной оптического пути 0,5 см против реактива при длине волны 625 нм.

Построение калибровочной кривой и расчет.

К 0,05—0,2 мл калибровочного раствора добавляют такое количество кислотной смеси, чтобы общий объем был 2,2 мл, перемешивают и выдерживают 20 мин при температуре 37 °С, так же как и опытные пробы, а затем фотометрируют. Окраска калибровочной пробы, в которую взято 0,05 мл калибровочного раствора, соответствует содержанию холестерина в плазме 3 ммоль/л, пробы, в которую взято 0,1 мл, — содержанию 6 ммоль/л и т.д.

1. Попадание воды приводит к помутнению раствора.

2. Следы гемолиза или желтушность исследуемой плазмы или сыворотки служат причиной завышенных результатов.

3. Можно использовать для фотометрии и кюветы с длиной оптического пути 1 см, тогда количество кислотной смеси удваивают, а количество исследуемого материала остается прежним.

Метод определения содержания холестерина в сыворотке крови, основанный на холестеролоксидазной реакции

Холестерин и его эфиры выделяются из липопротеинов детергентами. Холестеринэстераза гидролизует эфиры. В результате последующего ферментативного окисления холестерина холестериноксидазой образуется Н2О2.

Эфир холестерина + Н2О2 ↔ холестерин + жирные кислоты;

Холестерин + О2 ↔ холестен-3-ОН + Н2О2;

Н2О2 + n-хлорфенол + 4-аминоантипирин ↔ хинониминовый краситель + Н2О2.

Уровни нормы ХС, выявленные при обследовании “в целом здорового населения”, относительно высоки. С точки зрения риска развития ишемической болезни сердца уровни ХС желательны:

1) рекомендуемый — менее 5,18 ммоль/л;

2) умеренный риск — 5,18—6,19 ммоль/л;

3) высокий риск — более 6,22 ммоль/л.

Увеличение концентрации ХС наблюдается при полигенной гиперлипопротеидемии типа II А и II Б, III, гиперлипопротеидемии I, IV, V типов, вторичной, приобретенной гиперлипопротеидемии, отмечается также при заболеваниях печени, внутри- и внепеченочном холестазе, гломерулонефрите, нефротическом синдроме, ХПН, злокачественных опухолях поджелудочной железы, простаты, гипотиреозе, подагре, ИБС, беременности, диабете, алкоголизме, анальбуминемии, дисглобулинемии, острой перемежающейся порфирии.

Снижение концентрации холестерина обнаружено при дефиците α-липопротеида (болезнь Танжера), гипо- и а-β-липопротеидемии, некрозе печеночных клеток, злокачественных опухолях печени, гипертиреозе, нарушении всасывания, нарушении питания, мегалобластной анемии, сидеробластной анемии, талассемии, острых тяжелых заболеваниях, обширных ожогах, хронических обструктивных заболеваниях легких, умственной отсталости, ревматоидном артрите, лимфангиоэктазии кишечника.

Отмечены сезонные колебания уровня ХС, более высокие осенью и зимой, более низкие весной и летом. Повторное определение ХС после инфаркта миокарда необходимо проводить через три месяца.

Метод определения содержания липопротеинов высокой плотности в сыворотке крови

Липопротеины очень низкой плотности (ЛПОНП) и низкой плотности (ЛПНП) в противоположность липопротеинам высокой плотности (ЛПВП) образуют нерастворимые комплексы с гепарином в присутствии ионов марганца. В надосадочной жидкости, оставшейся после осаждения ЛПНП и ЛПОНП, остается α-холестерин или ЛПВП.

Нормальное содержание ХС ЛПВП в сыворотке крови составляет 0,9—1,9 ммоль/л.

Хиломикроны, ЛПОНП (липопротеины очень низкой плотности) и ЛПНП (липопротеины низкой плотности) осаждаются добавлением фосфорно-вольфрамовой кислоты и хлорида магния.

После центрифугирования супернатант содержит ЛПВП (липопротеины высокой плотности) — фракцию, содержание холестерина в которой определяется ферментативно.

Полученные значения достоверны, если:

1) в пробе нет хиломикронов;

2) концентрация триацилглицеридов не превышает 400 мг/100 мл;

3) в пробах не обнаруживается следов III типа дислипопротеинемии.

При измерении на Hg 546 нм происходит завышение количества ЛПВП холестерина спектром поглощения гемоглобина, которое можно игнорировать при значениях до 200 мг Нb/100 мл.

Полученный при центрифугировании супернатант должен быть прозрачен. Если проба содержит большое количество триглицеридов (более 1000 мг/100 мл), осаждение липопротеинов может быть неполным (мутный супернатант) или часть осадка может плавать на поверхности. В этих случаях развести образец 1 : 1 0,9%-ным раствором NaCl и повторить осаждение.

Клинико-диагностическое значение ХС-ЛПВП

Эпидемиологические исследования показали обратную зависимость между уровнями ХС-ЛПВП и распространенностью ИБС. Определение ХС-ЛПВП способствует выявлению риска развития ИБС.

Повышению уровня ХС-ЛПВП способствуют такие заболевания, как первичный билиарный цирроз, хронический гепатит, алкоголизм, прочие хронические интоксикации.

Ссылка на основную публикацию
Adblock
detector